凝膠滲透色譜儀是一種用于測定高分子材料分子量及其分布的高效液相色譜技術。它廣泛應用于聚合物、生物大分子(如蛋白質、多糖)、合成樹脂、涂料、橡膠及制藥等領域的研發與質量控制。其工作原理基于分子在溶液中的流體力學體積差異。色譜柱內填充有多孔性凝膠顆粒,當樣品溶液隨流動相(通常為*THF、水或其他有機溶劑)流經色譜柱時,較小的分子可進入凝膠孔隙,路徑更長,保留時間更久;而較大的分子被“排阻”在孔外,快速通過色譜柱。因此,不同分子量的組分按從大到小的順序依次流出,實現分離。
1、樣品處理
溶解:根據樣品性質選擇溶劑(如*、甲苯、DMF等),確保完q溶解。難溶樣品可采用加熱、攪拌或超聲輔助,但需避免高溫破壞樣品結構(如蛋白質變性)。
過濾:使用0.2μm或0.45μm濾膜過濾樣品,去除雜質和顆粒物,防止堵塞色譜柱。過濾時需注意濾膜材質與溶劑兼容性(如有機相用聚四氟乙烯濾膜,水相用尼龍濾膜)。
濃度控制:樣品濃度通常為0.1%-1%,過高會導致色譜峰展寬或平頭峰,過低則降低檢測靈敏度。
2、流動相準備
選擇:根據色譜柱類型和樣品性質選擇流動相,確保與檢測器兼容(如示差折光檢測器需避免使用揮發性溶劑)。
脫氣:流動相需脫氣處理(超聲、真空或氦氣鼓泡),防止氣泡進入色譜柱影響分離效果。
純度:使用HPLC級溶劑,避免雜質干擾或額外色譜峰出現。
3、儀器預熱與檢查
預熱:開機后預熱30分鐘至1小時,使儀器達到穩定工作狀態。
部件檢查:確認泵、進樣器、色譜柱、檢測器等連接正常,無泄漏或松動。
廢液瓶檢查:及時更換廢液瓶,防止溢出污染儀器。
